| 李凡,杜联芳,王惠萍,韦芳.超声靶向辐照微泡造影剂介导重组腺相关病毒转染肾癌细胞的研究[J].中国医学影像技术,2010,26(s1):108 |
| 超声靶向辐照微泡造影剂介导重组腺相关病毒转染肾癌细胞的研究 |
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| 目的 重组腺相关病毒(rAAV)载体在肾细胞癌(RCC)基因治疗领域具有一定的前景,但转染率低下限制了其应用。本研究探索超声靶向破坏微泡(UTMD)技术能否提高rAAV在肾癌细胞(786-0)的转染率。方法 应用不同感染复数(MOI)的rAAV2转染786-0细胞;用不同条件UTMD预辐照rAAV2,以不同条件UTMD辐照786-0细胞,辐照结束即刻测定细胞生存率;联合rAAV2及UTMD转染786-0细胞,应用real-timePCR检测基因拷贝数,并与未使用UTMD预辐照rAAV2者(对照组)进行比较。结果 1×104~1×106 MOI的rAAV2在786-0细胞的转染率为(17.28±2.44)%。当UTMD的声强≤2W/cm2,时间≤120s,微泡体积≤60μl,频率1MHz,占空比(DC)50%,脉冲重复频率(PRF)100Hz时,UTMD辐照不会影响rAAV2的转染活性。在不影响786-0细胞生存率及rAAV2活性的UTMD参数下(声强1 W/cm2,时间60s,微泡体积30μl,频率1MHz,DC50%,PRF100Hz),rAAV2联合UTMD对786-0细胞的转染率较对照组提高2~3倍;在1周内,这种提高效应稳定维持;RealtimePCR结果显示,此方法增加了病毒载体进入细胞的水平,细胞内病毒载体量较对照组提高近9倍。结论 UTMD可安全有效地提高rAAV2在非嗜向性细胞的转染率。 |
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