| 申宝忠,孙夕林,王可铮,王凯,黄涛.转铁蛋白受体为报告基因的Endostatin逆转录病毒的筛选与活性鉴定[J].中国医学影像技术,2010,26(s1):121 |
| 转铁蛋白受体为报告基因的Endostatin逆转录病毒的筛选与活性鉴定 |
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| 目的 体外筛选以转铁蛋白受体(TfR)为报告基因的内皮抑素(ES)逆转录病毒,并检测其体外表达情况及治疗效果,以期为下一步活体分子成像研究奠定基础。方法 用阳离子脂质体将转铁蛋白受体(TfR)为报告基因的重组逆转录病毒载体pLP-LNCX-ES-IRES-TfR(pLET)转染包装细胞PT67,通过G418浓度梯度筛选出阳性克隆。收集培养细胞上清液进行病毒滴度测定,并体外转染人肝癌细胞HepG2。MTT 法测细胞生长曲线,观察ES对肿瘤细胞生长的影响;RTPCR检测ES基因的表达情况;免疫组化法测定ES蛋白质的表达情况;鸡囊胚法观察ES对血管生成的抑制。结果 ①建立稳定表达的PT67-RV-ES包装细胞系,其病毒滴度为4×107cfu;②病毒转染细胞的荧光定量RT-PCR结果见ES和TfR基因表达,而未转染的HepG2 细胞无表达,且二者均24h即开始表达,至72h达高峰后持续表达;免疫组化可见细胞浆中ES蛋白表达;③病毒对HepG2 细胞生长未见明显的抑制作用;④鸡囊胚法见病毒液对血管生成有明显的抑制作用。结论逆转录病毒pLET在体外能有效感染肿瘤细胞HepG2,表达具有活性的目的蛋白,且对肿瘤细胞生长无明显抑制作用,此病毒可进一步通过转铁蛋白受体(TfR)的分子成像在活体观察基因治疗的效果并揭示肿瘤早期局部生长、远隔部位转移的发生、发展。 |
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