| 李华丽,程敬亮,张勇,王娟.体外磁标记骨髓基质细胞移植治疗大鼠创伤性脑损伤的在体MRI观察[J].中国医学影像技术,2010,26(s1):120 |
| 体外磁标记骨髓基质细胞移植治疗大鼠创伤性脑损伤的在体MRI观察 |
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| 目的 采用高场MR在体监测超顺磁性氧化铁颗粒(SPIO)标记大鼠骨髓基质细胞(BMSCs)在脑损伤模型大鼠脑内的分布与迁移。方法 采用Feeney法制作大鼠脑外伤(TBI)模型,然后平均分为4组:A 组:TBI后移植SPIO 标记BMSCs;B组:TBI后移植单纯SPIO;C组:TBI后移植未标记BMSCs;D组:TBI后移植培养液。其中,A组为实验组,其余均为对照组。①SPIO 标记:将1μl的SPIO(Resovist)加入2ml培养基混匀,使其终浓度为35μg/ml;然后将P6代细胞消化离心后加入上述加有SPIO 的培养基混匀;37℃、5% CO2 条件下共同孵育。②细胞内铁颗粒的鉴定:采用细胞普鲁士蓝染色法,将贴壁干细胞去除培养液后以磷酸盐缓冲液(PBS)冲洗,4%戊二醛固定30min,蒸馏水冲洗3次,2%亚铁氰化钾-6%盐酸水溶液孵育30min,1%核固红复染3min,蒸馏水洗去多余的核固红,显微镜下观察。③细胞移植:TBI模型鼠建立后24h进行立体定向移植手术。模型鼠用10%水合氯醛0.32ml/100g体质量腹腔注射再次麻醉后,俯卧位保定于立体定向架上,损伤顶叶皮层接受细胞移植。移植位点位于左顶叶TBI周围皮质(前囟后3mm,旁开2mm,深5mm),垂直距离以硬脑膜为标准。A组移植SPIO 磁化标记的BMSCs;B组仅移植等量等浓度的SPIO;C组移植等量等浓度的未标记BMSCs;D组仅移植等量的培养液。取10μl细胞(约0.5×106 个)悬液或对照液5min内注射,留针5min,然后缓慢拨出注射针头。移植完毕缝合头皮,腹腔注射庆大霉素2000U 抗菌治疗,回笼饲养。于移植后第1、3天及1、3周对各组实验动物行MR 扫描。结果 SPIO 标记后的BMSCs在倒置显微镜下可见细胞质内有黄色铁颗粒。行普鲁士蓝染色后,标记BMSCs胞质内可见阳性蓝色颗粒。透射电镜下胞浆内可见许多散在的铁颗粒。A组在各个时间点均可见位于左侧半球的移植部位在T1WI、T2WI、T2* WI及磁敏感加权成像(SWI)序列上呈类圆形点状低信号,以T2* WI及SWI序列的敏感度、对比度明显,SWI最明显(图3B);B组仅在移植后1天接受MR检查,呈低信号,3天及以后MR检查可见低信号消失;C、D两组在各个时间点均未见显示。A组动物左侧顶叶皮质的类圆形点状低信号在3天、1周及3周逐渐向损伤区迁移,尤其在SWI序列上显示更清楚。结论 高场MRI能够在活体内连续示踪观察SPIO 标记的BMSCs的分布与迁移,且以SWI序列最为敏感。 |
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